3、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)：植物組織培養(yǎng)技術(shù)，植物體細(xì)雜交技術(shù)。

2、植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性。

1、細(xì)胞工程：指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過(guò)細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上的操作，按照人的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門(mén)綜合科學(xué)技術(shù)。

15．（1）一定的流動(dòng)性 （2）SARS病毒感染后產(chǎn)生的效應(yīng)B細(xì)胞,單克隆抗體+抗癌

藥物（3）造血干細(xì)胞 細(xì)胞分化（4）有絲　加倍　龍膽紫 （5）無(wú)限增值,產(chǎn)生單

一抗體

課后練習(xí)

1D　2C　3D　4C　5B　6B　7A　8D　9D　10A　11D　12B　13C　14D　15D　16C　17A　18ACD　19ABC　20BD  21BCD

22（1）纖維素酶(或果膠酶)（2）rrHH、RRhh（3）置大于800勒克斯光照下培養(yǎng)，收集分化的細(xì)胞團(tuán) （4）細(xì)胞的全能性 II （5）抗體與抗原結(jié)合，發(fā)揮特異性免疫效應(yīng)  （6）非典患者　2；（7）液體　動(dòng)物血清

23（1）每種效應(yīng)B細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體  　瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖 

（2）動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)　�。�3）雜交瘤

（4）抗體是蛋白質(zhì)，若口服則被消化，使抗體失去其功能　　（5）體液    效應(yīng)

24（1）不能  因?yàn)闆](méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生此種抗體的效應(yīng)B細(xì)胞  （2）細(xì)胞融合  滅活的病毒（或聚乙二醇）  雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)  特異性抗體  在體外培養(yǎng)條件下大量繁殖  （3）培養(yǎng)液  小鼠腹水  （4）制備單克隆抗體

25(1)獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞(2)既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體(3)動(dòng)物細(xì)胞融合  動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)  滅活病毒  (4)動(dòng)物血清(5)胰蛋白酶  (6)雜交瘤細(xì)胞  能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞(7)方法：培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞　　原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖

26（1）相互接觸  接觸抑制  單層（或一層）     胰蛋白酶 （2）衰老甚至死亡   不死性  降低減少 （3）由于活細(xì)胞的膜具有選擇透過(guò)性，大分子染料不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色（或由于死細(xì)胞的膜喪失了選擇透過(guò)性，大分子染料能夠進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)而著色） （4）中  （5）冷凍（或超低溫、液氮）  酶    新陳代謝

（6）抗原

27 I．有毒物質(zhì)會(huì)使動(dòng)物細(xì)胞發(fā)生染色體變異    Ⅲ．(2)①分別放人等量的細(xì)胞懸浮液    ③把3個(gè)培養(yǎng)瓶放在37℃(或適宜溫度)的恒溫箱中培養(yǎng)    (3)②加1～2滴龍膽紫溶液染色    (4)有絲分裂中小白鼠正常細(xì)胞有絲分裂中期高倍顯微照片   Ⅳ．(1)甲、乙兩種化學(xué)物質(zhì)均有毒性．且乙的毒性比甲的毒性大  (2)對(duì)照動(dòng)物細(xì)胞在正常培養(yǎng)狀態(tài)下染色體變異頻率非常低

28⑴葉綠體   ⑵纖維素酶和果膠酶   ⑶病毒   聚乙二醇（振蕩、離心、生物、化學(xué)因素等）  ⑷無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境    營(yíng)養(yǎng)   溫度和pH    氣體環(huán)境   ⑸組織培養(yǎng)中用到的培養(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，有利于培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，然而各種雜菌同樣也可以在上面迅速生長(zhǎng)，所以組織培養(yǎng)過(guò)程中污染現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生。培養(yǎng)基一旦被污染，迅速生長(zhǎng)的各種雜菌不但會(huì)和培養(yǎng)物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，而且這些雜菌生長(zhǎng)的過(guò)程中會(huì)生成大量對(duì)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)，導(dǎo)致培養(yǎng)物迅速死亡（2分）     ⑹由于人們對(duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)有完全搞清楚，通常加入血清、血漿等一些天然成分   ⑺動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)     ⑻無(wú)   因?yàn)榕咛ピ谀阁w子宮中完成胚胎發(fā)育               

14．（1）纖維素酶和果膠酶    細(xì)胞壁  　離心、振動(dòng)、電激  產(chǎn)生新的細(xì)胞壁   （2）植物組織培養(yǎng)    （3）幼齡動(dòng)物的組織或器官或胚胎   胰蛋白酶    滅活的病毒誘導(dǎo)    雜種細(xì)胞    流動(dòng)性    （4）抗原   效應(yīng)B細(xì)胞、記憶細(xì)胞、抗體   骨髓瘤細(xì)胞    （5）3   雜交瘤細(xì)胞   用特定選擇培養(yǎng)基   小鼠腹腔內(nèi)增殖

　解析：單克隆抗體的制備是利用了雜交瘤細(xì)胞具有既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體的特點(diǎn)，單克隆抗體的制備包括誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞融合，經(jīng)過(guò)多次篩選獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲得單克隆抗體，其中重要的技術(shù)手段包括動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等。

 ①                               

②在體外大量繁殖      產(chǎn)生特異性抗體

③動(dòng)物細(xì)胞融合      動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

課堂練習(xí)

1B　2D　3A　4B　5B　6D　7A　8B　9B　10D　11D　　12BCD　13ABCD

答案

例1：

解析：植物原生質(zhì)體融合或動(dòng)物細(xì)胞融合均需誘導(dǎo)，誘導(dǎo)方法可以是電刺激等物理方法，聚乙二醇處理等化學(xué)方法，動(dòng)物細(xì)胞還常用滅活的病毒誘導(dǎo)融合。去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁常用纖維素酶和果膠酶，將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞常用胰蛋白酶。小鼠骨髓瘤細(xì)胞和經(jīng)抗原免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞的主要用途是制備單克隆抗體。某種植物（如：染色體數(shù)目為2N），甲乙兩品種的體細(xì)胞雜種的染色體數(shù)目是兩品種體細(xì)胞染色體數(shù)之和（4N），甲乙兩品種雜交后代的染色體數(shù)目不改變（2N）。  選D

例2：

28、自然界中有一種含有葉綠體的原生動(dòng)物―眼蟲(chóng)，這說(shuō)明植物的細(xì)胞器同樣可以在某些動(dòng)物細(xì)胞中存活。某同學(xué)提出問(wèn)題“動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞之間可以實(shí)現(xiàn)雜交嗎？”他嘗試設(shè)計(jì)出下列具體的實(shí)驗(yàn)方案。結(jié)合實(shí)驗(yàn)方案回答：

實(shí)驗(yàn)原理：根據(jù)眼蟲(chóng)的特點(diǎn)，動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞之間在理論上是可以實(shí)現(xiàn)雜交的。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

（1）①中選的植物材料細(xì)胞中，必須有的細(xì)胞器是            。

（2）③過(guò)程所用的酶是            和                 

（3）④過(guò)程除了用電激之外，還可以用         、    　　　  等做誘導(dǎo)因素。

（4）⑤過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿(mǎn)足的條件是      、       、     、     。

（5）在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要強(qiáng)調(diào)所用的器械的滅菌和實(shí)驗(yàn)人員的無(wú)菌操作，原因是          

                                                                       。

（6）在⑤⑥過(guò)程中，通常要添加血清，原因是                                。

（7）如果讓動(dòng)植物雜交種批量培養(yǎng)生產(chǎn)，可以用           技術(shù)。

（8）動(dòng)植物雜交種細(xì)胞是否有細(xì)胞壁？       。理由是                       。

（1）經(jīng)研究人員實(shí)驗(yàn)得知，A、B、C三個(gè)培養(yǎng)瓶的Q值依次為：QA=1.3%，QB=12.5%，QC=0.1%，由此可知該實(shí)驗(yàn)的結(jié)論是                                         。

（2）在實(shí)驗(yàn)中，C培養(yǎng)瓶起                         作用，C瓶的Q值說(shuō)明         

                                                                       。　　

27、現(xiàn)有甲、乙兩種可能有一定毒性的化學(xué)物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)室研究人員欲通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)鑒定它們是否有毒性并比較二者毒性的強(qiáng)弱。請(qǐng)你以一個(gè)研究人員的身份參與此項(xiàng)研究，完成下列有關(guān)問(wèn)題。   

 Ⅰ．實(shí)驗(yàn)原理：                                                    

根據(jù)這種變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)(以下稱(chēng)Q值)，可判斷該化學(xué)物質(zhì)的毒性。

 Ⅱ．材料用具：活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液、動(dòng)物細(xì)胞固定液、適宜濃度的龍膽紫溶液、適宜濃度的化學(xué)物質(zhì)甲溶液、適宜濃度的化學(xué)物質(zhì)乙溶液、蒸餾水、滴管、培養(yǎng)皿、剪刀、錐形瓶、恒溫箱、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、小白鼠正常有絲分裂各時(shí)期的高倍顯微照片。

 Ⅲ．實(shí)驗(yàn)步驟：

 (1)制備細(xì)胞懸浮液。

把活的小白鼠胚胎放在培養(yǎng)皿中剪碎，轉(zhuǎn)入錐形瓶中，加入胰蛋白酶液處理，使胚胎組織離散成單個(gè)細(xì)胞，再加入動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸浮液。

 (2)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

①取A、B、C 3個(gè)潔凈的培養(yǎng)瓶，                        ；

②A、B兩個(gè)培養(yǎng)瓶中分別加入等量的甲、乙溶液。C瓶中加入等量的蒸餾水，搖勻；

③                                                        

(3)制作臨時(shí)裝片。

①當(dāng)細(xì)胞增殖到大約8代左右時(shí)，同時(shí)從恒溫箱中取出3個(gè)培養(yǎng)瓶，用胰蛋白酶液處理，加入動(dòng)物細(xì)胞固定液，迅速殺死細(xì)胞并固定細(xì)胞分裂相；

②靜置一段時(shí)間后，分別從各培養(yǎng)瓶底部吸取適量的細(xì)胞懸浮液，滴在與培養(yǎng)瓶有相同編號(hào)的載玻片的中央，                                    ，3min~5min后，蓋上蓋玻片。

（4）鏡檢和統(tǒng)計(jì)

把臨時(shí)裝片放在顯微鏡下，先用低倍鏡后用高倍鏡，尋找處于             期的細(xì)胞，并與                  進(jìn)行對(duì)比，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算該期變異的細(xì)胞占該期細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)(Q值)。

Ⅵ.結(jié)果分析與結(jié)論：