Question

6．角膜緣干細(xì)胞能更新角膜上皮細(xì)胞，角膜上皮細(xì)胞對(duì)維持角膜的透明性至關(guān)重要．回答下列問題：
（1）將角膜緣組織剪碎，加入胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，可獲得大量游離分散的細(xì)胞．細(xì)胞懸液在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，當(dāng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象時(shí)停止增殖．
（2）通常角膜緣干細(xì)胞的培養(yǎng)控制在10代以內(nèi)，原因是保持細(xì)胞正常的二倍體核型．
（3）離體培養(yǎng)角膜緣干細(xì)胞時(shí)，一般需要在合成培養(yǎng)基中加入血清（或血漿）等天然成分，培養(yǎng)時(shí)所需的氣體主要有O₂和CO₂．
（4）研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子能夠調(diào)控角膜緣干細(xì)胞分化．放線菌素D能通過阻礙RNA聚合酶的功能進(jìn)而抑制細(xì)胞因子的調(diào)控，由此推斷該抑制過程發(fā)生在轉(zhuǎn)錄（選填“復(fù)制”、“轉(zhuǎn)錄”或“翻譯”）水平．
（5）研究還發(fā)現(xiàn)，皮膚干細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化為角膜緣干細(xì)胞，這體現(xiàn)了皮膚干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性．臨床上常用誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化的方法修補(bǔ)損傷或衰老的組織器官，從而解決了供體器官不足（或器官移植后免疫排斥）問題．

Answer 1

分析 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營(yíng)養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．
3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞．
4、胚胎干細(xì)胞的主要用途是：
①可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；
②是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料．ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持不分化的狀態(tài)．在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí)，就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向分化，這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡機(jī)理提供了有效的手段；
③可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、糖尿病、老年癡呆癥、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；
④培育各種組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題．

解答 解：（1）將角膜緣組織剪碎，加入胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，可獲得大量游離分散的細(xì)胞．細(xì)胞懸液在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，當(dāng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象時(shí)停止增殖．
（2）10代以內(nèi)的細(xì)胞能保持細(xì)胞正常的二倍體核型，故通常角膜緣干細(xì)胞的培養(yǎng)控制在10代以內(nèi)．
（3）離體培養(yǎng)角膜緣干細(xì)胞時(shí)，一般需要在合成培養(yǎng)基中加入血清（或血漿）等天然成分，培養(yǎng)時(shí)所需的氣體主要有O₂和CO₂．
（4）研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子能夠調(diào)控角膜緣干細(xì)胞分化．RNA聚合酶是催化DNA轉(zhuǎn)錄形成RNA的酶．放線菌素D能通過阻礙RNA聚合酶的功能進(jìn)而抑制細(xì)胞因子的調(diào)控，由此推斷該抑制過程發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平．
（5）研究還發(fā)現(xiàn)，皮膚干細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化為角膜緣干細(xì)胞，這體現(xiàn)了皮膚干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性．臨床上常用誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化的方法修補(bǔ)損傷或衰老的組織器官，從而解決了供體器官不足或器官移植后免疫排斥問題．
故答案為：
（1）胰蛋白酶或膠原蛋白酶        接觸抑制
（2）保持細(xì)胞正常的二倍體核型
（3）血清（或血漿）       O₂和CO₂
（4）轉(zhuǎn)錄
（5）發(fā)育的全能性     供體器官不足（或器官移植后免疫排斥）

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用等相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問題的能力，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．