Question

18．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用．土壤中的某些微生物對(duì)尿素具有有分解作用，請(qǐng)就圖1所示土壤中的尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)分析回答．
（1）分析下面培養(yǎng)基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，則應(yīng)除去上述NaNO₃成分，并加入尿素和葡萄糖物質(zhì)，以補(bǔ)充氮源和碳源．
（2）同學(xué)甲一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是菌液濃度過高，應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？增大稀釋倍數(shù)．同學(xué)乙一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖2所示．推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是涂布不均勻．
（3）四位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量．在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是D．
A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23
B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是22和26，取平均值24
C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26
D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25
（4）同學(xué)丙在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）1.17×10⁷．
（5）用這種方法測(cè)定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落．
（6）同學(xué)丁從上圖稀釋10⁵倍的培養(yǎng)基中篩選出150個(gè)菌落，遠(yuǎn)高于其他同學(xué)的結(jié)果，如果他們測(cè)定的是同一土壤樣品，則可能的原因是選擇培養(yǎng)基被雜菌污染了，請(qǐng)你通過設(shè)置對(duì)照來確定該原因?qū)⑼瑢W(xué)丁配制的選擇培養(yǎng)基不接種而置于相同環(huán)境下培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否被污染．

Answer 1

分析 本題是對(duì)用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、培養(yǎng)液中的成分、常用的接種方法等相關(guān)知識(shí)的綜合性考查，回憶微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、培養(yǎng)液中的成分、常用的接種方法的具體操作和目的，然后結(jié)合問題進(jìn)行解答．

解答 解：（1）題干所給的培養(yǎng)基配方中缺少碳源，氮源是NaNO₃，若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，則應(yīng)該使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，即除去NaNO₃．同時(shí)，尿素分解菌屬于異養(yǎng)型生物，培養(yǎng)基配方中應(yīng)該添加尿素和葡萄糖物質(zhì)，以補(bǔ)充氮源和碳源．
（2）培養(yǎng)基上的菌落連成一片最可能是菌液濃度過高導(dǎo)致的，應(yīng)當(dāng)增大稀釋倍數(shù)．由圖2可知，該同學(xué)采用的是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒有很好的分散開來，可能是涂布不均勻?qū)е碌模?br />（3）A只涂布了一個(gè)平板，B只涂布了兩個(gè)平板，這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說服力不夠；C其中一個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明操作過程出現(xiàn)錯(cuò)誤，數(shù)據(jù)缺乏真實(shí)性，因此正確可信的是D．
（4）在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）中的菌落數(shù)是=10⁵×23.4×$\frac{1}{0.2}$=1.17×10⁷個(gè)．
（5）當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落，因此用這種方法測(cè)定得密度偏低．
（6）培養(yǎng)基上有其他雜菌的菌落，可能肯定是該大腸桿菌的品系被污染了，將同學(xué)丁配制的選擇培養(yǎng)基不接種而置于相同環(huán)境下培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否被污染．
故答案為：
（1）NaNO₃    尿素和葡萄糖    氮源和碳
（2）菌液濃度過高  增大稀釋倍數(shù)  涂布不均勻 
（3）D
（4）1.17×10⁷
（5）多　　當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落 
（6）選擇培養(yǎng)基被雜菌污染了（培養(yǎng)基中混入了其他N源，因而導(dǎo)致不能分解尿素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)）    將同學(xué)丁配制的選擇培養(yǎng)基不接種而置于相同環(huán)境下培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否被污染（可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為條件對(duì)照，判斷選擇培養(yǎng)基是否起到選擇的作用）．

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，考生要明確選擇培養(yǎng)基的選擇作用；識(shí)記培養(yǎng)基為微生物提供的營(yíng)養(yǎng)成分，識(shí)記常用的接種方法和具體操作過程；特別注意滅菌和消毒的對(duì)象和區(qū)別．