Question

根據(jù)所學生物學知識回答下列問題：
（1）若要將某目的基因通過農桿菌轉化法導入植物細胞，先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的

 

中，然后用該農桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的

 

上．
（2）目前臨床上使用的紅細胞生成素（一種糖蛋白，用于治療腎衰性貧血）

 

主要來自基因工程技術生產的重組人紅細胞生成素（rhEPO）．檢測rhEPO的體外活性需用抗rhEPO的單克隆抗體．分泌該單克隆抗體的細胞，可由rhEPO免疫過的小鼠B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成，在融合過程中至少需要進行

 

次篩選．
（3）在“試管牛”的培育過程中，采用激素處理可使良種母牛一次排出多枚卵母細胞，最常用的激素是

 

．從良種公牛采集的精子需

 

后才能進行受精作用；防止多精入卵的兩道屏障依次為

 

、

 

．
（4）生態(tài)系統(tǒng)內即使某個物種由于某種原因而死亡，也會很快有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置，從而避免系統(tǒng)結構或功能失衡．這體現(xiàn)了生態(tài)工程的什么原理

 

A．協(xié)調與平衡原理      B．物種多樣性原理C．物質循環(huán)再生原理  D．整體性原理
（5）下表為幾種限制性核酸內切酶識別的序列和切割的位點．

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ
識別序列和切割位點

如圖，已知某DNA在目的基因的兩端1、2、3、4四處有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位點．現(xiàn)用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時切割該DNA片段（假設所用的酶均可將識別位點完全切開），下列各種酶切位點情況中，可以防止酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀的是

 

．
A．1 為PstⅠ，2為EcoRⅠ，3為EcoRⅠ，4為BamHⅠ
B．1 為EcoRⅠ，2為BamHⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ
C．1 為BamHⅠ，2為EcoRⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ
D．1 為EcoRⅠ，2為PstⅠ，3為PstⅠ，4為BamHⅠ
（6）運用基因工程技術已經(jīng)創(chuàng)造出了“蜘蛛羊”，該羊的乳汁中含有蛛絲蛋白，高強度的蛛絲蛋白可用于許多重要的特種工業(yè)領域．為保證實驗成功，產生蛛絲蛋白的基因需從cDNA文庫中獲取，并與

 

等調控組件重組在一起，然后與載體相連構建成為表達載體；再通過

 

方法，將表達載體導入羊的

 

，獲得重組細胞．將獲得的重組細胞培養(yǎng)成早期胚胎后，移植到經(jīng)過

 

處理的受體母羊子宮內．因為我們對細胞所需的營養(yǎng)條件還沒有完全研究清楚，所以在早期胚胎的培養(yǎng)中，往往還需要添加

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,胚胎移植

專題：

分析：1、農桿菌轉化發(fā)生的原理：農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據(jù)農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．
3、受精過程為：頂體反應→穿越放射冠→穿越透明帶（透明帶反應）→卵細胞膜反應（卵黃膜封閉作用）→卵子完成減數(shù)第二次分裂并釋放第二極體→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂開始．

解答： 解：（1）農桿菌轉化法是現(xiàn)將目的基因組合到農桿菌Ti質粒的T-DNA上，然后把重組質粒導入到農桿菌細胞中，利用農桿菌感染植物細胞，將目的基因插入植物細胞的染色體DNA上．
（2）單克隆抗體的制備流程：首先用相應的抗原免疫小鼠，從免疫的小鼠的脾臟中提取B淋巴細胞，與小鼠骨髓瘤細胞融合，并在特定的選擇培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細胞，然后在通過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞，用該細胞進行體內培養(yǎng)或體外培養(yǎng)獲得單克隆抗體．可見，該過程中進行了2次篩選．
（3）給母畜注射促性腺激素可促進其超數(shù)排卵；精子獲能后才具備與成熟卵子受精的能力；防止多精受精的兩道屏障：透明帶反應、卵黃膜封閉作用．
（4）由“生態(tài)系統(tǒng)內即使某個物種由于某種原因而死亡，也會很快有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置”可知這里主要體現(xiàn)的是物種的多樣性，所以該生態(tài)工程的原理為物種多樣性原理．
（5）A、若1為PstⅠ，2為EcoRⅠ，3為EcoRⅠ，4為BamHⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時切割該DNA片段，可防止酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，A正確；
B、若1為EcoRⅠ，2為BamHⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時切割該DNA片段，得到目的基因兩側都有BamHⅠ酶切形成的黏性末端，這樣會導致酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，B錯誤；
C．若1為BamHⅠ，2為EcoRⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時切割該DNA片段，得到目的基因兩側都有BamHⅠ酶切形成的黏性末端，這樣會導致酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，C錯誤；
D．若1為EcoRⅠ，2為PstⅠ，3為PstⅠ，4為BamHⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時切割該DNA片段，得到目的基因兩側都有PstⅠ酶切形成的黏性末端，這樣會導致酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，D錯誤．
故選：A．
（6）為了讓目的基因在轉基因羊的乳腺細胞中表達，需要在重組質粒中添加羊的乳腺蛋白基因的啟動子．培育轉基因動物的受體細胞為受精卵，導入目的基因常用顯微注射法．將獲得的重組細胞培養(yǎng)成早期胚胎后，移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理的受體母羊子宮內．因為我們對細胞所需的營養(yǎng)條件還沒有完全研究清楚，所以在早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，往往還需要添加動物血清．
故答案為：
（1）T-DNA     染色體DNA
（2）雜交瘤2
（3）促性腺激素獲能透明帶反應、卵黃膜封閉作用
（4）B   
（5）A
（6）羊的乳腺蛋白基因的啟動子   顯微注射    受精卵   同期發(fā)情   動物血清

點評：本題綜合考查基因工程、細胞工程、胚胎工程和生態(tài)工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各步驟中需要注意的細節(jié)；識記單克隆抗體的制備工程；識記胚胎移植的具體工程，能根據(jù)圖中和題干要求答題．