研究人員利用基因工程技術(shù)對肺癌的治療進行了大量研究,肺部細胞中的let-7基因表達減弱,癌基因RAS表達增強,會引發(fā)肺癌.研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘毎麑崿F(xiàn)表達,發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制.該基因工程技術(shù)基本流程如圖所示,據(jù)圖回答.
(1)在基因工程中通常選擇細菌質(zhì)粒作為載體,原因是
;如果某質(zhì)粒由1000個脫氧核苷酸組成,脫氧核苷酸平均分子量為a,則該質(zhì)粒的質(zhì)量為
.
(2)圖甲中在構(gòu)建重組載體時,酶切目的基因和酶切質(zhì)粒時,所用的限制酶可以不同,但是產(chǎn)生的粘性末端必須是
.
(3)圖甲中在將酶切后的目的基因?qū)氲矫盖泻蟮馁|(zhì)粒上時需要的酶是
,圖乙中l(wèi)et-7基因轉(zhuǎn)錄過程需要的酶是
,這兩種酶作用的化學鍵都是
.
(4)EcoR I限制酶只能識別序列一GAATTC一,并只能在G與A之間切割.若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoR I的切點,請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端.
(5)原代培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng).原代培養(yǎng)隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂,空間因素和營養(yǎng)因素會限制其進一步生長.此時就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分(組織細胞分散開),重新接種到另外的培養(yǎng)器皿內(nèi)再進行培養(yǎng),這個過程就稱為傳代或者再培養(yǎng).圖甲中進行傳代培養(yǎng)操作時,需要用
酶處理貼附在原代培養(yǎng)培養(yǎng)皿壁上的細胞,以利于傳代培養(yǎng).
(6)研究發(fā)現(xiàn),let-7基因能影響RAS基因的表達,其影響機理如圖乙所示.從分子水平的角度分析,其作用機理是
.
(7)如圖所示pBR322是目前常用的人工質(zhì)粒載體.如果將BamHI處理后的pBR322質(zhì)粒與用BgIⅡ處理得到的目的基因進行重組,并將重組質(zhì)粒導入原本無amp
R和tet
R的大腸桿菌進行培養(yǎng).為了檢測重組質(zhì)粒是否成功導入大腸桿菌,現(xiàn)將上述大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖二的菌落.再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上,使絨布面沾上菌落,然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置).與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是
,圖三結(jié)果顯示,多數(shù)大腸桿菌內(nèi)導入的是
.