Question

回答有關(guān)生物技術(shù)的問題．
I：抗體的制備經(jīng)歷了細(xì)胞學(xué)層面和分子學(xué)層面兩種合成途徑的研究．下列是生物學(xué)技術(shù)制備抗體的兩個途徑模式簡圖．

（1）在獲取抗體之前，需要向健康人體注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重復(fù)注射一次．免疫學(xué)稱細(xì)胞A為

 

．
（2）①至②過程中獲取的抗體稱為

 

，其中①是

 

．
Ⅱ：如圖中，結(jié)構(gòu)甲的建構(gòu)可用下圖1和2表示．圖1表示含有目的基因的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列．現(xiàn)有4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為下表所示．

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
識別序列及切割位點

（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為

 

bp．
（4）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d．從雜合子中分離出圖1及對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有

 

種不同長度的DNA片段．
（5）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行拼接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是

 

．在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要添加

 

的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)．
（6）目的基因表達(dá)過程中，RNA聚合酶能否特異性識別DNA中特定的核苷酸序列

 

（填能或不能）

Answer 1

考點：單克隆抗體的制備過程,基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：據(jù)圖分析，細(xì)胞A表示效應(yīng)B細(xì)胞，細(xì)胞Y表示雜交瘤細(xì)胞，①過程表示動物細(xì)胞融合，②過程動物細(xì)胞培養(yǎng)，③過程提取信使RNA，④過程表示逆轉(zhuǎn)錄，⑤表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，⑥表示導(dǎo)入受體細(xì)胞．
根據(jù)圖1分析，DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置．
根據(jù)圖2分析，若使用MboI會同時破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞．

解答： 解：Ⅰ、（1）向健康人體注射特定抗原，提取出A漿細(xì)胞（效應(yīng)B淋巴細(xì)胞），在人體參與體液免疫．
（2）過程①至②抗體的獲取稱為單克隆抗體，其中①是細(xì)胞融合過程，Y細(xì)胞稱為雜交瘤細(xì)胞．
Ⅱ、（3）SmaⅠ識別的序列為GGGCCC，切割會產(chǎn)生平末端；圖1中DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534 bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置，從而兩個位點切割后產(chǎn)生的DNA片段的長度分布為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度為537、790、661．
（4）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經(jīng)過SmaI完全切割會產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經(jīng)過切割后會產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會產(chǎn)生4種不同長度的片段．
（5）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的MboI，若使用Mbo I會同時破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌．因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進(jìn)行互補，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況，可能導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)．
（6）目的基因表達(dá)過程中，RNA聚合酶能特異性識別DNA中特定的核苷酸序列中的啟動子，轉(zhuǎn)錄形成信使ENA．
故答案為：
Ⅰ（1）漿細(xì)胞（效應(yīng)B淋巴細(xì)胞）        
（2）單克隆抗體          細(xì)胞融合     
Ⅱ（3）537、790、661（寫全給分）
（4）4
（5）BamHⅠ抗生素B
（6）能

點評：本題考查單克隆抗體的制備、基因工程等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生識圖能力、信息的提取與應(yīng)用能力，難度較大．