Question

【題目】（一）（1）制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌，用___________蘸取少量的菌懸液，在MRS 乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得單菌落，單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選______________的最簡單的方法之一。

（2）下圖所示的劃線分離操作，正確的是________。

（3）為篩選胞外a淀粉酶分泌型菌種，一般從米酒廠周圍獲得土樣,用無菌水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，一段時間后在培養(yǎng)基表面滴加_______，可在菌落周圍觀察到透明的水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種,需挑選若干個___________與菌落直徑比值大的菌落，分別利用________培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)進行擴增。然后將培養(yǎng)液離心，取上清液用于檢測酶活性。

（二）嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶,為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用, 利用大腸桿菌表達BglB酶，開展了以下試驗。（圖中啟動子與RNA聚合酶結(jié)合，終止子是給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號的DNA序列）

（1）_________擴增bglB基因時，選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。

（2）如下圖為質(zhì)粒限制性核酸內(nèi)切酶切圖譜，為使獲得的bglB基因與質(zhì)粒載體連接， bglB基因兩端需分別含有___和___不同限制酶的識別序列。

（3）將重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞，為了促進該過程，應(yīng)該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是________________。

（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為_____________________________________________。

（5）下列有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶的敘述中正確的是（________）

A.用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，被水解的磷酸二酯鍵有2個

B.限制性核酸內(nèi)切酶識別的序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大

C.- CATG ↓-和一G↓ GATCC- -序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的粘性末端堿基數(shù)不同

D.只有用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒

Answer 1

【答案】接種環(huán) 高表達菌株 B 碘液 水解圈直徑 液體 PCR NdeⅠ BamHⅠ 增加大腸桿菌細胞壁的通透性 轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 B

【解析】

閱讀題干信息可知，該題考查的知識點較多，綜合性較強，涉及到微生物的培養(yǎng)以及兩種接種方法、基因工程的幾個基本步驟及其注意事項等，回憶和梳理相關(guān)知識點，根據(jù)題目逐步分析答題。

（一）（1）根據(jù)題意分析，接種方法為平板劃線法，應(yīng)該有接種環(huán)蘸取少量的菌懸液，在MRS 乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得單菌落；單菌落的分離是是用于篩選高表達菌株的最簡單的方法之一。

（2）平板劃線法應(yīng)該多次劃線，且每一次劃線都從上一次劃線的末端開始，因此A圖很難得到由單個細胞發(fā)育而來的菌落，A錯誤；B圖每一次劃線從上次劃線末端開始，容易得到由單個細胞發(fā)育而來的菌落，B正確；C圖劃線沒有從上次劃線的末端開始，不能得到由單個細胞發(fā)育而來的菌落，C錯誤；D圖劃線不是從上次劃線末端開始，不容易得到由單個細胞發(fā)育而來的菌落，D錯誤。

（3）淀粉遇碘變藍，而a淀粉酶分泌型菌種產(chǎn)生的a淀粉酶能夠催化淀粉水解，則水解后遇碘不能變藍，在菌落周圍形成透明的水解圈；水解圈越大，說明菌種分解淀粉的能力越強，因此若要篩選酶活性較高的菌種，需挑選若干個水解圈直徑與菌落直徑比值大的菌落，分別利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)進行擴增。

（二）（1）基因工程中，擴增目的基因（bglB基因）常用方法是PCR技術(shù)。

（2）據(jù)圖分析，圖示基因表達載體上有多個多種限制酶切割位點，但是目的基因必須插入啟動子與終止子之間，且不能破壞啟動子、終止子、標記基因等部位，因此要將目的基因插入該表達載體只能用NdeⅠ、BamHⅠ兩種限制酶進行切割，則bglB基因兩端需分別含有這兩種限制酶的識別序列。

（3）將目的基因?qū)�入大腸桿菌等微生物細胞時，需要用鈣離子處理，增加大腸桿菌細胞壁的通透性，使其成為感受態(tài)，以便目的基因的導(dǎo)入。

（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，是因為轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出了有活性的BglB酶。

用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，需要切割目的基因的兩側(cè)，因此被水解的磷酸二酯鍵有4個，A錯誤；限制性核酸內(nèi)切酶識別的序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；-CATG↓-和一G↓GATCC- -序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的粘性末端堿基數(shù)都是4個，C錯誤；用兩種不同的限制酶切割目的基因的兩側(cè)以及質(zhì)粒，也能形成重組質(zhì)粒，D錯誤。