Question

[生物一現(xiàn)代生物科技專題]必答題
血管內(nèi)皮生長因子（VE．GF）能促進眼部視網(wǎng)膜隨管的病理性生長．臨床上可用VEGF抗體的Fab片段（即抗體的活性片段）作為藥物治療視網(wǎng)膜病變．以下是利用大腸桿菌來大量和合成該抗體片段的技術(shù)路線圖，請回答下關(guān)問題：

（1）科學(xué)家已經(jīng)測出VEGF的抗體Fab片段的氨基酸序列，因此可以通過

 

方法來獲取目的基因．獲取目的基因后，還需要在其兩端加上限制酶HindIII和XhoI識別序列和啟動子T7等序列，T7的位置應(yīng)該在

 

（填l/2/3/4）．
（2）大腸杼菌經(jīng)Ca²⁺處理，成為

 

細(xì)胞，能吸收外源DNA，與重組質(zhì)�；旌弦欢螘r間后培養(yǎng)，培養(yǎng)基需添加

 

以篩選目的菌株．將篩選出的大腸桿菌進行擴大培養(yǎng)，可以用

 

作為抗原與提取出的蛋白雜交來鑒定是否合成抗體Fab片段蛋白．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示是利用大腸桿菌來大量和合成該抗體片段的技術(shù)路線圖，首先獲得目的基因（血管內(nèi)皮生長因子（VE．GF），其次構(gòu)建基因表達載體，然后將基因表達載體導(dǎo)入受體細(xì)胞（大腸桿菌細(xì)胞），最后進行篩選、培養(yǎng)和檢測．

解答： 解：（1）科學(xué)家已經(jīng)測出VEGF的抗體Fab片段的氨基酸序列，因此可以通過人工合成法來獲取目的基因，即根據(jù)Fab片段的氨基酸序列推測出信使RNA序列，再推測出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，然后用化學(xué)的方法以單核苷酸為原料合成．獲取目的基因后，還需要在其兩端加上限制酶HindIII和XhoI識別序列和啟動子T7等序列，啟動子應(yīng)位于目的基因上游，且不能被限制酶切割去除，因此T7的位置應(yīng)該在圖中的2處．
（2）大腸杼菌經(jīng)Ca²⁺處理，成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞；由圖可知，構(gòu)建基因表達載體時，四環(huán)素抗性基因被破壞，而卡那霉素抗性基因沒有被破壞，因此在培養(yǎng)基需添加卡那霉素以篩選目的菌株．將篩選出的大腸桿菌進行擴大培養(yǎng)，可以用血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）作為抗原與提取出的蛋白雜交來鑒定是否合成抗體Fab片段蛋白．
故答案為：
（1）人工合成法    2
（2）感受態(tài)    卡那霉素     血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）

點評：本題結(jié)合利用大腸桿菌來大量和合成該抗體片段的技術(shù)路線圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中的細(xì)節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．