Question

【題目】牛奶含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、微量元素等物質(zhì)頗受人們的喜歡。但有些人喝牛奶后，不能完全消化其中的乳糖。若將乳糖酶基因?qū)�入奶�；�因組中，便可在乳腺中產(chǎn)生不含乳糖或乳糖含量很低，而其他營養(yǎng)成分又不受影響的牛奶。請回答下列問題：

（1）構(gòu)建基因表達載體時，需要獲取僅在________細胞中特異性表達的基因的啟動子，然后還要采用________技術(shù)檢測奶牛的基因組上是否插入了目的基因。

（2）將重組的表達載體導(dǎo)入奶牛受精卵常用的方法是________。受精卵體外培養(yǎng)所需的培養(yǎng)液成分一般比較復(fù)雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸以及________等物質(zhì)。

（3）通過________技術(shù)能獲得多個胚胎從而獲得多個轉(zhuǎn)乳糖酶基因奶牛。為了獲得母牛，通常選用囊胚中的________細胞進行性別鑒定，請例舉一項性別鑒定的方法________。

Answer 1

【答案】奶牛乳腺 DNA 分子雜交 顯微注射法 血清（或血漿） 胚胎分割 滋養(yǎng)層 檢測性染色體形態(tài)（或與性別有關(guān)的基因、或巴氏小體檢測）

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2、性別鑒定的方法：

（1）取囊胚中滋養(yǎng)層細胞進行性別鑒定，這樣不會破壞胚胎。

（2）用SRY特異性探針對擴增產(chǎn)物進行檢測，若形成雜交帶，則說明其含有SRY基因（位于Y染色體上性別決定基因），則胚胎的性別為雄性。

（1）根據(jù)題意可知，將乳糖酶基因?qū)�入奶�；�因組中，便可在乳腺中產(chǎn)生不含乳糖或乳糖含量很低，而其他營養(yǎng)成分又不受影響的牛奶，因此構(gòu)建基因表達載體時，需要獲取僅在奶牛乳腺細胞中特異性表達的基因的啟動子，要檢測奶牛的基因組上是否插入了目的基因，可以采用DNA分子雜交技術(shù)，即利用目的基因作為探針與從奶牛細胞中提取的DNA進行雜交。

（2）將目的基因?qū)�入動物細胞的方法是顯微注射法。受精卵體外培養(yǎng)所需的培養(yǎng)液成分一般包括：一些無機鹽和有機鹽類外，還需要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸以及血清等物質(zhì)。

（3）利用胚胎分割技術(shù)可以獲取多個基因型相同的胚胎。根據(jù)以上分析可知，對早期胚胎進行性別鑒定可以采用囊胚中的滋養(yǎng)層細胞進行，這樣不會破壞胚胎。除外根據(jù)性染色體的形態(tài)和大小不同，性別鑒定還可以采用檢測性染色體形態(tài)的方法，或者用SRY特異性探針對擴增產(chǎn)物進行檢測，觀察是否形成雜交帶進行。