Question

基因文庫(kù)是通過(guò)克隆方法保存在適當(dāng)寄主（如大腸桿菌）中的某種生物、組織、器官或細(xì)胞類型的所有DNA片段而構(gòu)成的克隆集合體．圖1中①～⑤表示基因文庫(kù)的構(gòu)建過(guò)程，相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）從理論上分析，步驟①形成的DNA片段經(jīng)純化后，再經(jīng)凝膠電泳分離檢測(cè)可看到圖2中的

 

  電泳帶，步驟②中“局部消化”的含義是

 

．經(jīng)步驟③“連接反應(yīng)”后形成的重組DNA片段不只一種，其原因是

 

．
（2）在培養(yǎng)噬菌體前先要培養(yǎng)大腸桿菌，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如果統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌種群密度明顯高于實(shí)際值，除計(jì)算錯(cuò)誤外，可能的原因有

 

等．
（3）重組噬菌體感染大腸桿菌后，噬菌體的DNA在大腸桿菌內(nèi)進(jìn)行

 

的合成，同時(shí)兩者組裝成完整的新噬菌體顆粒．
（4）基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)（如cDNA文庫(kù)），基因組文庫(kù)的插入片段是

 

，cDNA文庫(kù)的片段是以

 

 為模板合成的互補(bǔ)

 

片段．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：①表示用限制酶切割形成DNA片段；②是用限制酶切割并進(jìn)行局部消化；③是指構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程；④表示重組噬菌體的過(guò)程；⑤表示噬菌體感染大腸桿菌，構(gòu)建基因文庫(kù)．步驟①形成的DNA片段經(jīng)純化后包括兩種長(zhǎng)度的DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離檢測(cè)可看到兩條電泳帶，即圖2中的a．

解答： 解：（1）由圖可知，步驟①形成的DNA片段經(jīng)純化后包括兩種長(zhǎng)度的DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離檢測(cè)可看到兩條電泳帶，即圖2中的a；步驟②中“局部消化”是指酶切使之成為長(zhǎng)度為20kb的DNA片段．因?yàn)?0kb的DNA片段可正接cosL端也可反接cosL端，所以經(jīng)步驟③“連接反應(yīng)”后形成的重組DNA片段不只一種．
（2）在培養(yǎng)噬菌體前先要培養(yǎng)大腸桿菌，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如果統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌種群密度明顯高于實(shí)際值，除計(jì)算錯(cuò)誤外，可能的原因有沒(méi)有震蕩搖勻、從培養(yǎng)液的下層取樣；沒(méi)有染色將死的大腸桿菌也計(jì)數(shù)在內(nèi)；在計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)室中大腸桿菌數(shù)量時(shí)，將所有壓在邊線上的大腸桿細(xì)胞都進(jìn)行了計(jì)數(shù)等．
（3）噬菌體感染大腸桿菌后，只有DNA進(jìn)入大腸桿菌，并作為模板控制合成子代噬菌體的DNA和蛋白質(zhì)，同時(shí)將兩者組裝成完整的新噬菌體顆粒．
（4）基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)（如cDNA文庫(kù)），基因組文庫(kù)的插入片段是基因組DNA，cDNA文庫(kù)的片段是以mRNA為模板合成的互補(bǔ)DNA片段．
故答案為：
（1）a    酶切使之成為一定大小的DNA片段    20kb的DNA片段可正接cosL端也可反接cosL端（或20kb的DNA片段可正接cosR端也可反接cosR端）  
（2）沒(méi)有震蕩搖勻，從培養(yǎng)液的下層取樣、沒(méi)有染色將死的大腸桿菌也計(jì)數(shù)在內(nèi)、在計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)室中大腸桿菌數(shù)量時(shí)，將所有壓在邊線上的大腸桿細(xì)胞都進(jìn)行了計(jì)數(shù)  
（3）復(fù)制和指導(dǎo)外殼蛋白  
（4）基因組DNA  mRNA    DNA

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合流程圖，考查基因工程、噬菌體侵染細(xì)菌的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)圖能力和識(shí)記能力；能理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問(wèn)題作出準(zhǔn)確判斷和得出正確結(jié)論的能力．