Question

【題目】科學家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr 為抗氨芐青霉素基因），其中①—④ 是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關步驟，I 、II 表示相關結(jié)構(gòu)或細胞。請據(jù)圖作答：

（l）基因工程的核心是_______________________________。

（2）構(gòu)建基因表達載體時，可用一種或多種限制酶進行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應該選用_________________酶，分別對目的基因和質(zhì)粒進行切割，切割后產(chǎn)生的DNA 片段分別為_______種和______ 種。

（3）要篩選已導入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞,應首先選擇含______________________

的培養(yǎng)基中篩選番茄組織細胞。

（4）研究人員通常采用_______________________法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄細胞�?nèi).

（5）基因工程操作中的第四步是目的基因的檢測與鑒定, 在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應的蛋白質(zhì)通常采用_________________技術(shù)，采用_____________方法在個體生物學水平上檢測目的基因是否表達。

（6）圖中③④分別指的是___________ 、 __________,欲獲得人工種子應培養(yǎng)到___________階段。將II細胞培養(yǎng)成完整植物體所用技術(shù)的理論基礎是__________________________

Answer 1

【答案】 基因表達載體的構(gòu)建 PstI和SmaI 4 2 氨芐青霉素 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 抗原--抗體雜交 低溫培養(yǎng) 脫分化 再分化 胚狀體 植物細胞的全能性

【解析】（1）基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心。、

（2）為了防止黏性末端任意拼接，應選擇雙酶切，該實例應選用PstI和SmaI酶，分別對目的基因和質(zhì)粒進行切割，切割后產(chǎn)生的DNA 片段分別為4種和2種。

（3）質(zhì)粒上的標記基因是抗氨芐青霉素基因，可選擇含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中篩選番茄組織細胞。

（4）將目的基因?qū)�入植物細胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法或基因槍法。

（5）檢測目的基因是否翻譯通常采用抗原－抗體雜交技術(shù)，采用低溫培養(yǎng)方法在個體生物學水平上檢測目的基因是否表達。

（6）圖中③④分別指脫分化和再分化；欲獲得人工種子應培養(yǎng)到胚狀體階段，植物組織培養(yǎng)的理論基礎是植物細胞的全能性。