Question

由于人突變細(xì)胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細(xì)胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細(xì)胞均不能在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但可在普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)．利用上述兩類(lèi)細(xì)胞融合獲得雜種細(xì)胞，在雜種細(xì)胞傳代過(guò)程中，鼠的染色體被保留下來(lái)，人的染色體隨機(jī)丟失，以至最后只剩一條或幾條人染色體（如圖，圖中數(shù)字代表保留的人染色體編號(hào)）．科研人員運(yùn)用這一方法確定了胸苷激酶基因所在的染色體．分析回答：
（1）細(xì)胞融合技術(shù)的意義是

 

．人、鼠細(xì)胞混合在一起，經(jīng)融合（只考慮兩兩融合）過(guò)程后共有

 

種細(xì)胞．與植物原生質(zhì)體融合過(guò)程相比，過(guò)程A特有的誘導(dǎo)方法是

 

．
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是

 

，培養(yǎng)箱中充入5%的CO₂氣體的主要作用是

 

．過(guò)程B用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，目的是

 

．
（3）染色體的主要組成成分是

 

，人鼠雜種細(xì)胞中除染色體外含有遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)是

 

．
（4）為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細(xì)胞中，人鼠融合細(xì)胞應(yīng)在

 

（填“HAT”或“普通”）培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．
（5）若將某次實(shí)驗(yàn)獲得的各種人鼠雜種細(xì)胞分別在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細(xì)胞能夠生長(zhǎng)，檢查雜種細(xì)胞中保留的人染色體情況如表（表中“+”表示有相應(yīng)染色體，“-”表示無(wú)相應(yīng)染色體）：根據(jù)表中信息，可推測(cè)人細(xì)胞中胸苷激酶基因位于

 

號(hào)染色體上．

雜種細(xì)胞	保留的人染色體
	2號(hào)	3號(hào)	5號(hào)	9號(hào)	12號(hào)	17號(hào)	21號(hào)
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

Answer 1

考點(diǎn)：動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程,細(xì)胞融合的概念及方法

專(zhuān)題：

分析：1、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較：

項(xiàng)目	細(xì)胞融合原理	細(xì)胞融合方法	誘導(dǎo)手段	用途
植物體細(xì)胞雜交	細(xì)胞膜的流動(dòng)性，（細(xì)胞的全能性）	去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合	離心、電刺激、聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)	克服遠(yuǎn)緣雜交不親和，獲得雜交植株
動(dòng)物細(xì)胞融合	細(xì)胞膜的流動(dòng)性	使細(xì)胞分散后，誘導(dǎo)細(xì)胞融合	離心、電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導(dǎo)	制備單克隆抗體的技術(shù)之一

2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．
3、分析表格：A、B、C三種雜種細(xì)胞共有的染色體是17號(hào)染色體．

解答： 解：（1）細(xì)胞融合技術(shù)可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙；人、鼠細(xì)胞混合在一起，經(jīng)融合（只考慮兩兩融合）過(guò)程后共有5種細(xì)胞，即人體細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、小鼠細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、人和鼠細(xì)胞融合形成的細(xì)胞、未融合的小鼠細(xì)胞、未融合的人體細(xì)胞．植物原生質(zhì)體融合的誘導(dǎo)方法有物理法和化學(xué)法，而誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有物理法、化學(xué)法和生物法，因此與植物原生質(zhì)體融合過(guò)程相比，過(guò)程A特有的誘導(dǎo)方法是生物法，即用滅活的病毒處理．
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染；培養(yǎng)箱中充入5%的CO₂氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH．人體細(xì)胞和小鼠細(xì)胞都不能在HAT培養(yǎng)基上單獨(dú)生存，但兩者的融合細(xì)胞可以在HAT培養(yǎng)基上生存，因此過(guò)程B用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的目的是篩選出人鼠融合細(xì)胞（雜種細(xì)胞）．
（3）染色體的主要成分是蛋白質(zhì)和DNA；在動(dòng)物細(xì)胞中，DNA主要分布在細(xì)胞核中，此外在線粒體中也有少量分布．
（4）突變細(xì)胞和正常細(xì)胞都不能在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但都能在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，因此為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細(xì)胞中，人鼠融合細(xì)胞應(yīng)在普通培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．
（5）在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細(xì)胞能夠生長(zhǎng)，而A、B、C三種雜種細(xì)胞共有的染色體是17號(hào)染色體，據(jù)此可推知人細(xì)胞中胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上．
故答案為：
（1）克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交（不親和）的障礙      5      用滅活的病毒處理
（2）防止雜菌污染   維持培養(yǎng)液適宜的pH   篩選出人鼠融合細(xì)胞（雜種細(xì)胞）
（3）DNA和蛋白質(zhì)       線粒體
（4）普通   
（5）17

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖表，考查動(dòng)物細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，能對(duì)動(dòng)植物細(xì)胞融合進(jìn)行比較；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，能結(jié)合圖表中信息準(zhǔn)確答題．