Question

13．如圖是對(duì)Ⅰ型糖尿病大鼠進(jìn)行基因治療的示意圖，據(jù)圖回答：

【注：Proinsulin DNA（胰島素原基因）；PCMV（某種質(zhì)粒）；kan^r（卡那霉素抗性基因）；EcoRⅠ、ClaⅠ、HindⅢ（限制性核酸內(nèi)切酶）】
（1）總RNA來(lái)自于胰腺細(xì)胞 （填“胰腺細(xì)胞”或“骨骼肌細(xì)胞”），過(guò)程②是利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增出大量的Proinsulin DNA．該技術(shù)的前提是需要根據(jù)所需片段的一段核苷酸序列合成引物．
（2）過(guò)程③需要用EcoRI、HindⅢ、DNA連接酶酶構(gòu)建出PCMV/Proinsulin DNA重組質(zhì)粒，再將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到處于感受態(tài)的細(xì)菌中，培養(yǎng)基加入卡那霉素的目的是篩選出含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌．
（3）為探明Proinsulin DNA在治療中的作用，除需要以不作處理的Ⅰ型糖尿病大鼠作為對(duì)照組之外，還需設(shè)置注射了同等劑量PCMV的Ⅰ型糖尿病大鼠作為對(duì)照，通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血液中血糖濃度（或胰島素濃度）來(lái)評(píng)估該基因治療的效果．

Answer 1

分析 分析題圖：圖中①為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，②是用限制酶切割獲取目的基因的過(guò)程，③是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，之后再將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，最后進(jìn)行篩選和鑒定．

解答 解：（1）胰島素基因只在胰腺中的胰島B細(xì)胞中才表達(dá)，因此總RNA來(lái)自于胰腺細(xì)胞；利用PCR技術(shù)可以在體外大量擴(kuò)增目的基因，該技術(shù)的前提是需要根據(jù)所需片段的一段核苷酸序列合成引物．
（2）目的基因兩側(cè)分別是限制酶EcoRI、HindⅢ的酶切位點(diǎn)，因此切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體需要這兩種限制酶，其次還需要DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用鈣離子處理微生物細(xì)胞，使之成為感受態(tài)；培養(yǎng)基加入卡那霉素的目的是篩選出含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌．
（3）為探明Proinsulin DNA在治療中的作用，除需要以不作處理的Ⅰ型糖尿病大鼠作為對(duì)照組之外，還需設(shè)置注射了同等劑量 PCMV的Ⅰ型糖尿病大鼠作為對(duì)照，通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血液中血糖濃度（或胰島素濃度）來(lái)評(píng)估該基因治療的效果．
故答案為：
（1）胰腺細(xì)胞     PCR       引物
（2）EcoRI、HindⅢ、DNA連接酶      感受態(tài)    篩選出含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌
（3）PCMV      血糖濃度（或胰島素濃度）

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．