Question

炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染�。畬μ烤也∫伤苹颊撸�可通過噬菌體裂解實驗確診．
細菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落．
（1）采集疑似患者的樣本進行分離培養(yǎng)時，需要制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基．下列有關(guān)操作方法正確的是

 

（多選）．
A．操作順序為計算、稱量、熔解、倒平板、滅菌
B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯
C．待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時進行倒平板
D．待平板冷卻凝固約5～10min后將平板倒過來放置
（2）通過平板劃線法獲得可疑菌落，圖1是平板劃線示意圖，劃線的順序為①②③④⑤．下列操作方法正確的是

 

．
A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌
B．劃線操作須在火焰上進行
C．在⑤區(qū)域中才可以得到所需菌落
D．在①②③④⑤區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌
細菌鑒定：實驗流程如圖2所示．
（3）實驗過程中，對配制的液體培養(yǎng)基的滅菌具體要求是

 

．
（4）在實驗Ⅳ中，先用無菌滴管吸取

 

滴于平板培養(yǎng)基表面，再用

 

涂勻，經(jīng)培養(yǎng)得到如圖中Ⅳ的6個菌落．然后在平板培養(yǎng)基的

 

（填數(shù)字標號）菌落上滴加

 

．觀察并記錄結(jié)果．

Answer 1

考點：微生物的分離和培養(yǎng),測定某種微生物的數(shù)量

專題：

分析：用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分為制備培養(yǎng)基和純化大腸桿菌兩個階段進行，其中制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．微生物接種的核心是防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純度．

解答： 解：（1）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱；
待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板；待平板冷卻凝固約5～10min后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿低在上；故選BCD．
（2）進行平板劃線操作之前，用將接種環(huán)在酒精燈火焰上進行灼燒滅菌；平板劃線操作應(yīng)在火焰旁進行，不能在火焰上進行；由題圖可知，5區(qū)域是第一區(qū)域，不可能在5區(qū)域獲得所需要的菌落，在最后一區(qū)域即1區(qū)域才有可能得到所需菌落；D、在1、2、3、4區(qū)域中劃線前都要對接種環(huán)進行灼燒滅菌，保證每次劃線的菌種來自上一區(qū)域的末端，5區(qū)域劃線前都要對接種環(huán)進行灼燒滅菌目的是防止雜菌污染，1區(qū)域劃線后進行灼燒滅菌是防止污染環(huán)境及操作者；故選D．
（3）培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌，條件是壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30分鐘．
（4）由圖可知，實驗Ⅳ的培養(yǎng)物來自實驗Ⅲ，先用無菌滴管吸取 實驗Ⅲ中的培養(yǎng)物滴于平板培養(yǎng)基表面，涂勻地采用無菌玻璃刮鏟．由題意可知，對炭疽病疑似患者，可通過噬菌體裂解實驗確，根據(jù)菌落的分布情況，所以對④⑤⑥或①②③的菌落滴加含噬菌體液體，觀察并記錄結(jié)果．
故答案為：
（1）BCD
（2）D
（3）壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30分鐘
（4）實驗Ⅲ中的培養(yǎng)物   無菌玻璃刮鏟      ④⑤⑥或①②③含噬菌體液體

點評：本題考查微生物分離相關(guān)知識，綜合考查了微生物的分離、純化和培養(yǎng)等知識．