Question

在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常常需要進(jìn)行微生物的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)．
（1）如圖是利用

 

法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步

 

分散到培養(yǎng)基的表面．
（2）分析下面培養(yǎng)基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄?7H₂O、KCl、H₂O．若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，則應(yīng)除去上述

 

成分，并加入

 

，以補(bǔ)充

 

源．
（3）三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量．在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下統(tǒng)計(jì)結(jié)果：甲同學(xué)涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是236和260，取平均值248-；乙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是210、240和250，取平均值233；丙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是21.212和256，取平均值163；在三位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)中，只有一位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)是正確的，指出另兩位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)為什么不正確？

 

．
（4）若在稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為233，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）

 

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Answer 1

考點(diǎn)：微生物的分離和培養(yǎng),測(cè)定某種微生物的數(shù)量,培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用

專(zhuān)題：

分析：1．分離菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的篩選
①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找．
②實(shí)例：PCR技術(shù)過(guò)程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來(lái)的Taq細(xì)菌中提取出來(lái)的．
（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度．pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)．
培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌．
2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）稀釋涂布平板法（間接）
①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．
②通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來(lái)推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)．
（2）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)
3．分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
4．實(shí)驗(yàn)流程
土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長(zhǎng)的菌落→鑒定

解答： 解：（1）由圖可知，其采取的是平板劃線法，該方法能把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面．
（2）培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，其氮源是尿素，所以培養(yǎng)基中要除去含氮物質(zhì)，即去除NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．
（3）甲同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作不合理，原因是只涂布了兩個(gè)個(gè)平板，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不具說(shuō)服力，乙同學(xué)也不合理，應(yīng)選擇30-300的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)．
（4）根據(jù)題意可知，每克樣品中的菌落數(shù)=平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)=233÷0.2×10⁶=1.165×10⁹．
故答案為：
（1）平板劃線    稀釋
（2）NaNO₃    尿素和葡萄糖    氮、碳
（3）甲同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作不合理，原因是只涂布了兩個(gè)個(gè)平板，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不具說(shuō)服力，乙同學(xué)也不合理，應(yīng)選擇30-300的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)
（4）1.165×10⁹

點(diǎn)評(píng)：本題考查微生物的分離和培養(yǎng)、測(cè)定某種微生物的數(shù)量等知識(shí)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分和微生物的接種方法，并能準(zhǔn)確判斷圖中的接種方法；能采用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和簡(jiǎn)單的計(jì)算．