
某研究性學(xué)習(xí)小組利用熒光素-熒光素酶生物發(fā)光法,測(cè)定人參愈傷組織中ATP的含量,以研究人參細(xì)胞能量代謝的特點(diǎn).
實(shí)驗(yàn)原理:熒光素在熒光素酶、ATP等物質(zhì)參與下,進(jìn)行反應(yīng)發(fā)出熒光;用分光光度計(jì)可測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度;當(dāng)熒光素和熒光素酶都足量時(shí),在一定范圍內(nèi),ATP的含量與發(fā)光強(qiáng)度成正比.
實(shí)驗(yàn)步驟:
(一)ATP的提�。悍Q取一定量的人參愈傷組織,研磨后沸水浴10min,冷卻至室溫,離心,取上清液.
(二)ATP的測(cè)定:吸取一定量的上清液,放入分光光度計(jì)反應(yīng)室內(nèi),并注入適量的所需物質(zhì),在有氧等適宜條件下進(jìn)行反應(yīng),記錄發(fā)光強(qiáng)度并計(jì)算ATP含量.
請(qǐng)回答:
(1)步驟一中的沸水浴處理,使酶的
被破壞而失活.
(2)步驟二注入的物質(zhì)中,屬于反應(yīng)物的是
;分光光度計(jì)反應(yīng)室內(nèi)能量形式的轉(zhuǎn)換是
.
(3)熒光素酶價(jià)格昂貴,為能準(zhǔn)確測(cè)定出ATP的含量,又能節(jié)省酶的用量,學(xué)習(xí)小組探究了“測(cè)定ATP時(shí)所需熒光素酶溶液的最佳濃度”,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖.
①學(xué)習(xí)小組配制了1×10
-8mol/L ATP標(biāo)準(zhǔn)液、70mg/L熒光素溶液(過量)和
溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn).
②結(jié)果表明:圖中
點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的熒光素酶濃度為最佳濃度.e、f、g點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的熒光素酶濃度不同,但發(fā)光強(qiáng)度相同,這是因?yàn)?div id="9nznbp1" class='quizPutTag' contenteditable='true'>