16.Rag
2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞.科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對Rag
2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療.其技術(shù)流程如圖1,圖2表示目的基因及限制酶切點(diǎn),圖3表示質(zhì)粒,據(jù)圖回答:

(1)重組細(xì)胞的細(xì)胞核來自(Rag
2基因缺失小鼠的)上皮細(xì)胞.
(2)將基因?qū)隕S細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有全能性.
(3)步驟②中,重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí),可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞.
(4)步驟③中,需要構(gòu)建含有Rag
2基因的表達(dá)載體.可以根據(jù)Rag
2基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag
2基因片段.
(5)對于干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切時(shí),可選用限制酶的組合為HindIII和PstI或EcoRI和PstI.
(6)將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察,選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo).為檢測干擾素基因是否表達(dá),可以采用抗原-抗體雜交的方法.