Question

人外周血單核細(xì)胞能合成白介素2（IL-2）．該蛋白可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解．研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個(gè)融合基因，并在酵母菌中表達(dá)，獲得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．其技術(shù)流程如圖．請(qǐng)回答：
（1）培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞的適宜溫度為

 

℃；圖中②表示

 

過程．
（2）表達(dá)載體1中的位點(diǎn)

 

，應(yīng)為限制酶BglⅡ的識(shí)別位點(diǎn)，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2．
（3）表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL-2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有

 

（起始、終止）密碼子，才能成功表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．
（4）應(yīng)用

 

雜交技術(shù)可檢測(cè)酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：據(jù)圖分析，①表示轉(zhuǎn)錄提取信使RNA，②表示逆轉(zhuǎn)錄形成目的基因，③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建．限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因．胚胎移植中受體的子宮不對(duì)外來(lái)胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能．對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育．

解答： 解：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和PH、無(wú)毒無(wú)菌的環(huán)境及合適的營(yíng)養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分；圖中②mRNA→cDNA，表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，推測(cè)位點(diǎn)a應(yīng)含有BglⅡ．
（3）融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中與IL-2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列中不能含有終止密碼，才能成功表達(dá)出IL-2-HsA融合蛋白．否則HSA蛋白將無(wú)法合成．
（4）應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案為：
（1）37   逆轉(zhuǎn)錄 
（2）a
（3）終止
（4）抗原-抗體

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件；識(shí)記基因表達(dá)載體的組成；明確啟動(dòng)子和終止子的功能；識(shí)記目的基因分子水平檢測(cè)的方法等．